蜘蛛侠：纵横宇宙是由乔伊姆·多斯·桑托斯,凯普·鲍尔斯,贾斯汀·汤普森执导、沙梅克·摩尔,海莉·斯坦菲尔德,奥斯卡·伊萨克,杰克·约翰逊,伊萨·雷,马赫沙拉·阿里,詹森·舒瓦兹曼,卡兰·索尼,丹尼尔·卡卢亚,安迪·萨姆伯格,布莱恩·泰里·亨利,劳伦·维勒斯,谢伊·惠格姆,格蕾塔·李,阿曼德拉·斯坦伯格 ,乔玛·塔科内,杰克·奎德,唐纳德·格洛弗,托比·马奎尔,安德鲁·加菲尔德,J·K·西蒙斯,贾雷尔·杰罗姆,凯瑟琳·哈恩,瑞秋·德拉彻,佩吉·陆,梅利莎·斯特姆,彼得·孙,主演的动画片，地球-65，蜘蛛女格温（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音）因为好友彼特之死而充满愧疚，而父亲对蜘蛛侠的误解也让她倍感焦虑。某次行动中，格温结识了来自其他宇宙的同伴米圭尔·奥哈拉和杰西卡·德鲁。从他们口中得知，为了防止多元宇宙进一步崩坏，米圭尔策划成立了由蜘蛛侠中的精英组成的突击队。格温受邀加入他们，并利用时空穿梭的机会来到了地球-1610，见到久违的迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）。此时的迈尔斯和父母关系紧张，他憧憬格温，渴望加入突击队又遭到拒绝。
随后迈尔斯又听到一个可怕的消息，每一个宇宙中，失去至亲正是所有蜘蛛侠..
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